Recomendaciones de Mantenimiento de Cromatógrafos Líquidos (HPLC/UHPLC)

Fases Móviles:

• Filtrar todas las soluciones acuosas (contengan o no sales) por membranas de filtros de poro 0.45um (HPLC) o 0.22um (UHPLC) y material compatible (Celulosa Regenerada/Nylon)
• Utilizar filtros de solventes en cada línea de solvente. Retirarlos periódicamente y lavarlos sumergiéndolos en agua con baño ultrasónico.
• Evitar dejar los canales en soluciones 100% acuosas (contengan o no sales) por más de 72hs. Estas soluciones forman fácilmente algas que se adhieren a las superficies.
• Utilizar solventes de grado adecuado (Grado HPLC)
• Evitar dejar los canales en soluciones acuosas (más del 40% de fase acuosa) por más de 7 días. Estas soluciones forman fácilmente algas que se adhieren a las superficies.
• Realizar lavados periódicos del sistema:
• • ​Cerrar el sistema quitando la columna cromatográfica y reemplazarla por un volumen muerto.
  • Evitar elevar la presión del sistema más allá de 30-40 bar
  • Luego de usar un buffer:
  • • Reemplazar el canal por Agua. Purgar y dejar pasando por el sistema 10 minutos (a flujo 1ml/min). Rotar la válvula de inyección a los 5 minutos a fin de desplazar el buffer en todo el circuito.
    • Reemplazar el canal por Metanol. Purgar y dejar pasando por el sistema 10 minutos (a flujo 1ml/min). Rotar la válvula de inyección a los 5 minutos a fin de desplazar el agua en todo el circuito.
    • Para volver a ocupar un canal con un Buffer previamente purgar el sistema con agua desplazando el eluyente orgánico del sistema a fin de evitar precipitaciones.
  • Quincenalmente/Mensualmente. Evitando la formación de biofilm:
  • • Colocar los 4 canales en solución de Ácido Fórmico 0.1% (1 ml de Ácido Fórmico en 1000ml de agua filtrada)
    • Establecer el flujo en 1ml/min mezclando:
    • • Canales A/B (5:95) – 5 minutos
      • Canales A/B (95:5) – 5 minutos
      • Canales C/D (5:95) – 5 minutos
      • Canales C/D (95:5) – 5 minutos
    • Colocar los 4 canales en algún Solvente Orgánico Compatible (Metanol/2-Propanol), purgar los 4 canales y mantener el flujo en 1ml/min durante 10 minutos. Reemplazar los canales por los solventes habituales antes de su uso.

•  En caso de requerir utilizar el sistema en Fase Normal (Hexano, Pentano, Heptano)
• • Colocar los 4 canales en Metanol HPLC y hacer pasar por todo el sistema durante 10 minutos (1ml/min). Rotar la válvula de inyección a los 5 minutos a fin llegar a todo el circuito.
  • Colocar los 4 canales en 2 Propanol HPLC y hacer pasar por todo el sistema durante 10 minutos (1ml/min). Rotar la válvula de inyección a los 5 minutos a fin llegar a todo el circuito.
  • Purgar el sistema con los solventes de Fase Normal requeridos. Estabilizar.
  • Finalizado el análisis reemplazar los solventes de Fase Normal por 2 Propanol HPLC y luego Metanol. No dejar el sistema detenido con solventes de Fase Normal.

Muestras:

• Filtrar las muestras y estándares a inyectar con filtros de jeringa de calidad cromatográfica, poro adecuado 0.45um (HPLC) o 0.22um (UHPLC) y material compatible (ver tabla abajo).
• Utilizar solventes de inyección compatibles con la Fase Móvil
• Utilizar viales de grado cromatográfico y septas compatibles con los solventes/diluyentes utilizados.
• Sellar los viales con tapas sin sobrepresión (ajustar pinzas crimpeadoras)
• Verificar las soluciones no precipitan al utilizar refrigeración en muestreadores automáticos.